Pesquisador(es)
Pesquisador(es) Responsável(eis):
Vera Bongertz
Instituição
Instituição:
Fundação Oswaldo Cruz; Instituto Oswaldo Cruz; Departamento de Imunologia, Lab. Aids e Imunologia Molecular
Homepage:
Parcerias institucionais:
Instituto de Pesquisas Evandro Chagas (José H. Pilotto e Beatriz Grinsztejn); Laboratório de Pesquisa e Análise do Gene, Florianópolis-SC (Maria Elizabeth Menezes); Prefeitura Municipal de Porto Alegre, Lab. Central da Prefeitura de Porto Alegre-RS (Luciene Cardoso Scherer, Cynara Carvalho Nunes e Simone M. de Castro).
Período de Vigência:
2005 – 2006
Situação:
Concluída
Introdução e Justificativa
Foi discutida a necessidade da padronização de metodologias de neutralização do HIV (OMS – UNAIDS, Milão, Itália, ago.2003) para comparar as 7 técnicas ora em uso utilizando os mesmos reagentes, para a seleção de metodologia a ser adotada na avaliação de testes de vacinas. Verificou-se a necessidade do uso de misturas (pools) de soros de indivíduos soropositivos para o HIV-1. Foi decidido formar os seguintes pools: (1) de indivíduos infectados misturados indiscriminadamente (África/América/Europa/Ásia); (2) A1/A2 Africano; (3) B Norte Americano, Europeu e Brasileiro; (4) BTailandês; (5) Bbr: Brasileiro; (6) C Africano, Brasileiro; (7) D Africano; (8) E Tailandês; (9) F1 Brasileiro; (10) F2 Africano; (11) G Africano; (12) H Africano. Também foi decidido usar isolados primários padrão de HIV-1, dois a quatro de cada subtipo. O projeto pretende a formação dos pools de soros e plasmas brasileiros e o isolamento de cepas padrão de HIV-1.
Objetivos
Preparar material (pool de soros e/ou plasmas e isolados de HIV-1) para padronizar e comparar as 7 técnicas de neutralização do HIV-1 ora em uso nos diversos laboratórios; Aproveitar o projeto internacional de padronização da neutralização do HIV-1 para um estudo de caracterização imunológica de isolados primários de HIV-1 do subtipo genético C.
Materiais e Método
1) Convidar à participação pela doação de sangue de pacientes infectados com HIV-1 em acompanhamento pelo Instituto de Pesquisas Evandro Chagas, Fiocruz, sob orientação do Dr José Henrique Pilotto: Pool 1 = soros de pacientes infectados com HIV-1 sem terapia antiretrovial; Pool 2 = soros de pacientes infectados com HIV-1 do subtipo B; Pool 3 = soros de pacientes infectados com HIV-1 do subtipo B variante Bbr; Pool 4 = soros de pacientes infectados com HIV-1 do subtipo F; 2) Convidar a participação de pacientes infectados com HIV-1 em acompanhamento na Prefeitura de Porto Alegre (Lacen), selecionados pela Dra. Luciene Scherer (40 pacientes) e do Laboratório de Pesquisa e Análise do Gene, em acompanhamento pela Dra. Maria Elizabeth Menezes; Pool 5 = soros de pacientes infectados com HIV-1 do subtipo C. Soros serão separados, aliquotados e estocados a 70ºC. Sangue colhido com citrato é submetido a gradiente de Hystopaque 1.077 para obtenção de plasmas (aliquotados para uso em testes de neutralização viral) e de células mononucleares a serem usadas no isolamento viral. A genotipagem do material oriundo do Sul do Brasil deve ser efetuada sob orientação da Dra. Mariza G. Morgado, por seqüenciamento dos genes gag/pol/env. Tentativas de isolamento seguindo as normas da WHO/UNAIDS serão feitas de todas as amostras obtidas (WHO-UNAIDS Guidelines, 2nd edition, 2002).
Resultados - Parciais ou Finais
Até o presente foi feita a coleta de sangue de 13 pacientes infectados com o genótipo B de HIV-1, 15 pacientes infectados com o genótipo B variante Bbr de HIV-1, 12 pacientes infectados com o genótipo F de HIV-1, e 30 pacientes infectados com HIV-1, recentemente integrados ao acompanhamento no Ipec, Fiocruz; Tentativas de isolamento viral foram efetuadas, e até o presente momento temos 2 isolados que atingiram os títulos em cultura necessários para testes de neutralização viral.
Palavras-Chave:
HIV-1. Anticorpos neutralizantes. Brasil. Padronização. Rede internacional.