Pesquisador(es)
Pesquisador(es) Responsável(eis):
Luíne Rosele Renaud Vidal
Instituição
Instituição:
Universidade Federal do Paraná (UFPR).
Endereço:
Rua XV de Novembro, 1299, Centro, Curitiba, PR, Brasil.
Homepage:
Período de Vigência:
2013-2015
Situação:
Concluída
Introdução e Justificativa
Os vírus HTLV 1/2 pertencem à família Retroviridae, sendo o HTLV 1 o primeiro retrovírus humano isolado em 1980 e reconhecido como o agente etiológico da leucemia da célula T do adulto (LTA), posteriormente da paraparesia espástica tropical (PET). Os vírus apresentam diferentes modos de transmissão: contato sexual, transfusão de hemocomponentes, injeção intravenosa entre usuários de drogas, além da transmissão vertical.
Objetivos
Padronizar técnicas de biologia molecular para confirmação e tipagem do HTLV 1/2 em amostras de pacientes com suspeita clínica de LTA/PET e portadores assintomáticos e estabelecer um algoritmo de confirmação molecular.
Materiais e Método
Para o desenvolvimento do estudo, coletaram-se, de todos os participantes da pesquisa, após assinatura do TCLE, amostras de sangue total com EDTA, do qual foi obtido o plasma, para pesquisa de anticorpos anti-HTLV, por meio do método de quimioluminescência (QMIA) e também a separação do concentrado de leucócitos para a pesquisa do DNA proviral. O concentrado de leucócitos foi submetido à extração do DNA genômico, o qual foi utilizado para o desenvolvimento dos métodos moleculares. Para a padronização dos métodos moleculares foram definidos os grupos: (a) pacientes com diagnóstico de PET (N=06); (b) portadores assintomáticos do HTLV (N=13); (c) doadores de sangue (N=30); (d) pacientes com Aids (N=30); e (e) paciente com esclerose múltipla N=01. Pelo método de QMIA, detectaram-se anticorpos para HTLV em 20 amostras: 06 PET, um Aids e 13 portadores assintomáticos. Estas foram submetidas ao teste confirmatório, Western Blot (WB), e 15 resultaram reagentes. Todas as amostras foram analisadas por meio da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para os genes pol/tax do HTLV.
Resultados - Parciais ou Finais
Observou-se como características operacionais dos testes de PCR convencional, em relação ao critério de testagem sorológica do HTLV, os parâmetros: Sensibilidade: 70% (IC 95%-46-88%); Especificidade: 100% (IC 95%-94-100%); VPN: 91% (IC 81-96%); VPP: 100% (IC 95% 77), Índice de Youden = 0,7. Realizou-se um levantamento de amostras reagentes nos testes sorológicos em dois bancos de sangue da cidade de Curitiba, no período de 1994 a 2015. Observou-se que de um total de 865.000 doações nos dois hemocentros a prevalência de doadores com anticorpos HTLV foi de 0,08%. Outro estudo foi realizado para a análise da prevalência de anticorpos anti-HTLV em gestantes de alto risco, atendidas na unidade de Tocoginecologia do HC-UFPR. Analisou-se um total de 643 amostras pelo método de QMIA, sendo quatro (0,6%) reagentes para HTLV, das quais dois (0,3%) foram confirmadas pelo método de PCR, sendo detectados os dois tipos de HTLV 1 e HTLV 2. Nenhuma das pacientes apresentou manifestações clínicas neurológicas ou hematológicas devido à infecção pelo HTLV.
Conclusões:
Concluiu-se que o fluxo de diagnóstico laboratorial foi válido para confirmar prevalência de anticorpos para o HTLV em região de baixa endemicidade. Sendo o teste de WB ainda problemático com relação aos resultados indeterminados e ao alto custo, os testes moleculares se mostraram uma alternativa para melhor definir os resultados, confirmando ou descartando os resultados positivos nos testes de triagem, além de tipar o HTLV, confirmando o diagnóstico laboratorial.
Palavras-Chave:
HTLV. Diagnóstico molecular. PCR. Gestantes. Pré-natal. Doadores de sangue.
Divulgação e/ou Publicações
VIDAL, Luíne Rosele Renaud. Impact of human T-lymphotropic virus (HTLV I/II) diagnosis on the frequency of mood disorders in a non-endemic area. International Journal of Virology and AIDS, 2015.
VIDAL, Luíne Rosele Renaud et al. Confirmatory molecular method for HTLV-1/2 infection in high-risk pregnant women. Jornal of Medical Virology, 2017.
VIDAL, Luíne Rosele Renaud. Molecular Diagnostic of HTLV in patients of a Non-Endemic Region. In: XIV CURSO INTERNACIONAL DE EPIDEMIOLOGIA MOLECULAR EM DOENÇAS INFECCIOSAS E PARASITÁRIAS EMERGENTES, 2014. (Apresentação de Trabalho/Resumo).
VIDAL, Luíne Rosele Renaud. Apresentação dos resultados no 1° Encontro Científico de Pesquisas Aplicadas à Vigilância em Saúde do Ministério da Saúde, 2014. (Apresentação de Trabalho/Congresso).
KILP, Elisa Dimmer. Estudo epidemiológico em doadores com sorologia positiva para o HTLV I/II no teste imunoenzimático em bancos de sangue na cidade de Curitiba (Biobanco, Hemobanco) no período e 1993 a 2015. 2014-2015. Trabalho de Conclusão do Curso de Biomedicina da UFPR.
MIRAVALHES, Rafaela. Trabalho de Conclusão de Residência no Programa de Residência Multiprofissional do HC-UFPR. 2014.
MEDEIROS, Ana Cristina Matheus. Investigação da infecção por vírus linfotrópico das células T humanas (HTLV) em de alto risco. Dissertação (Mestrado) – Programa de Pós-Graduação em Tocoginecologia. Setor de Ciências da Saúde, Universidade Federal do Paraná, Curitiba, 2016.
FERIN, Aline Naiara. Levantamento Epidemiológico de HTLV em gestantes atendidas no Serviço de Tocoginecologia do HC-UFPR. 2015-2016. Trabalho de Iniciação Científica – Bolsa UFPR/TN – Edital PIBIC.
VIDAL, Luíne Rosele Renaud et al. Confirmatory molecular method for HTLV-1/2 infection in high-risk pregnant women. Jornal of Medical Virology, 2017.
VIDAL, Luíne Rosele Renaud. Molecular Diagnostic of HTLV in patients of a Non-Endemic Region. In: XIV CURSO INTERNACIONAL DE EPIDEMIOLOGIA MOLECULAR EM DOENÇAS INFECCIOSAS E PARASITÁRIAS EMERGENTES, 2014. (Apresentação de Trabalho/Resumo).
VIDAL, Luíne Rosele Renaud. Apresentação dos resultados no 1° Encontro Científico de Pesquisas Aplicadas à Vigilância em Saúde do Ministério da Saúde, 2014. (Apresentação de Trabalho/Congresso).
KILP, Elisa Dimmer. Estudo epidemiológico em doadores com sorologia positiva para o HTLV I/II no teste imunoenzimático em bancos de sangue na cidade de Curitiba (Biobanco, Hemobanco) no período e 1993 a 2015. 2014-2015. Trabalho de Conclusão do Curso de Biomedicina da UFPR.
MIRAVALHES, Rafaela. Trabalho de Conclusão de Residência no Programa de Residência Multiprofissional do HC-UFPR. 2014.
MEDEIROS, Ana Cristina Matheus. Investigação da infecção por vírus linfotrópico das células T humanas (HTLV) em de alto risco. Dissertação (Mestrado) – Programa de Pós-Graduação em Tocoginecologia. Setor de Ciências da Saúde, Universidade Federal do Paraná, Curitiba, 2016.
FERIN, Aline Naiara. Levantamento Epidemiológico de HTLV em gestantes atendidas no Serviço de Tocoginecologia do HC-UFPR. 2015-2016. Trabalho de Iniciação Científica – Bolsa UFPR/TN – Edital PIBIC.
Aplicabilidade para o SUS
Introdução dos métodos sorológicos para HTLV para as gestantes de alto risco atendidas nos hospitais terciários ou postos de saúde mesmo em região não endêmica; levantar dados epidemiológicos para adoção de medidas de aconselhamento e de prevalência do vírus nas várias regiões do País; atendimento aos pacientes com síndromes relacionadas ao HTLV.