Pesquisador(es)
Pesquisador(es) Responsável(eis):
Maria Luiza Bazzo
Instituição
Instituição:
Universidade Federal de Santa Catarina, CCS/ACL e Hospital Universitário, Serviço de Análises Clínicas.
Homepage:
Parcerias institucionais:
Universidade Federal de Minas GeraisICB/ Laboratório de Vírus; Laboratório Central de Saúde Pública de Santa Catarina (Lacen-SC).
Período de Vigência:
2002 – 2003
Situação:
Concluída
Introdução e Justificativa
Aplicabilidade do método molecular de identificação de micobactérias, Ensaio da Mobilidade Eletroforética de Fitas Heteroduplas de DNA (MHMA), bem como da resistência a isoniazida, na rotina dos serviços de Saúde Pública. Os métodos selecionados têm como base propriedades moleculares das bactérias, associadas à facilidade de execução e custo operacional reduzido. A avaliação dos métodos moleculares foi feita em paralelo com os exames de rotina, dos serviços de Saúde Pública, para a identificação de micobactérias por um método mais sensível, específico, de baixo custo e, principalmente, rápido.
Objetivos
O objetivo deste trabalho foi de avaliar a aplicabilidade em rotina do método do Ensaio da Mobilidade Eletroforética de Fitas Heteroduplas de DNA (MHMA) para a identificação de micobactérias em amostras de escarro de indivíduos com suspeita clínica de tuberculose e co-infectados pelo HIV, além de implementar um método rápido para avaliação da resistência de micobactérias a isoniazida.
Materiais e Método
Foram analisadas 100 amostras de escarro, provenientes de pacientes HIV-1 soropositivos e com suspeita clínica de tuberculose do Estado de Santa Catarina. As amostras foram incluídas no estudo de forma anônima, não vinculada, e o projeto foi aprovado pela Comissão de Ética da Universidade Federal de Santa Catarina. As amostras, rotineiramente enviadas para diagnóstico no Laboratório Central de Saúde Pública – Lacen-SC, ou no Laboratório do HU, foram separadas em alíquotas para o diagnóstico e para as reações MHMA. As amostras foram analisadas pela baciloscopia; cultivo e identificação de micobactérias por métodos rotineiros de laboratórios de saúde pública; extração do DNA do escarro; amplificação por PCR com iniciadores para eubactérias, como controle das extrações e amplificação com iniciadores específicos para micobactérias. As amostras positivas na PCR com iniciadores para micobactérias foram submetidas ao MHMA para tipificação. A detecção da resistência à isoniazida, com amplificação por PCR, teve como alvo o gene KatG. A PCR de cultivos contaminados ou não também foi realizada para avaliação.
Resultados - Parciais ou Finais
A PCR com os iniciadores específicos para micobactérias (MYC 264 e F 285) apresentou capacidade de detecção a partir de 1 g de DNA. O MHMA está padronizado para tipificação rápida de micobactérias e tem se mostrado um método eficiente para uso em laboratórios derotina. O DNA obtido de escarro apresenta forte degradação e constituiproblema a ser resolvido para implementar o diagnóstico rápido a partir dessa amostra clínica. A PCR com iniciadores específicos para micobactérias feita com DNA extraído de cultura em meio de Löwenstein Jensen se mostrou positiva em 100% das amostras testadas. A PCR, com iniciadores específicos para micobactérias, feita com DNA extraído a partir de cultivos contaminados, e portanto sem utilidade para o diagnóstico tradicional, se mostrou positiva em todos os cultivos feitos a partir de amostras com baciloscopia positiva, fato que possibilitou a tipificação das micobactérias. A avaliação da resistência a isoniazida deve ser associada também a outros genes uma vez que o KatG não está relacionado com todos os casos de resistência a essa droga.
Palavras-Chave:
Micobactérias. MHMA. HIV.
Divulgação e/ou Publicações
BAZZO, M.L. et al. Identificação de Micobactérias pela PCR a partir de Culturas Contaminadas em Meio de Löwenstein-Jensen. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE MICROBIOLOGIA, 23., 2005, Santos.
__. Método de identificação e caracterização de micobactérias para uso em diagnóstico de rotina nos laboratórios de saúde. Tese (Doutorado) - Programa de Pós-Graduação em Microbiologia da Universidade Federal de Minas Gerais, 2006.
__. Relação entre a qualidade de amostras de escarro e o diagnóstico de micobacterioses por PCR. Arquivos Catarinenses de Medicina, Florianópolis, v.33, p.23-27, 2004.
__. Método de identificação e caracterização de micobactérias para uso em diagnóstico de rotina nos laboratórios de saúde. Tese (Doutorado) - Programa de Pós-Graduação em Microbiologia da Universidade Federal de Minas Gerais, 2006.
__. Relação entre a qualidade de amostras de escarro e o diagnóstico de micobacterioses por PCR. Arquivos Catarinenses de Medicina, Florianópolis, v.33, p.23-27, 2004.