Análise do polimorfismo genético do fator 1 derivado do estroma da medula óssea (SDF1) em indivíduos não-infectados e infectados pelo HIV-1, em Londrina e região do Estado do Paraná.

Edital/Chamamento: 
Pesquisas Científicas - Set/2001
Número do Projeto: 
667/2001

Pesquisador(es)

Pesquisador(es) Responsável(eis): 
Edna Maria Vissoci Reiche

Instituição

Instituição: 
Universidade Estadual de Londrina; Centro de Ciências da Saúde; Departamento de Patologia Aplicada; Análise Clínicas e Toxicológicas.
Parcerias institucionais: 
.
Período de Vigência: 
2001 – 2003
Situação: 
Concluída

Introdução e Justificativa

A epidemia causada pelo HIV-1 é crescente no Brasil e pouca informação sobre os fatores genéticos do hospedeiro relacionados à susceptibilidade e resistência à infecção pelo HIV-1 na população brasileira tem sido relatada. Um polimorfismo na região conservada 3’ não transcrita (3’UTR) do gene que codifica a quimiocina fator 1, derivado do estroma da medula óssea (SDF1), tem sido associado tanto com uma maior resistência à infecção e com o retardo da progressão da infecção pelo HIV-1 como com uma maior progressão para aids e morte por essa doença. Realizou-se um estudo transversal com o objetivo de determinar as prevalências do polimorfismo genético do SDF1 e do alelo mutante SDF13’A em 1.061 indivíduos divididos em quatro grupos: 136 controles saudáveis, doadores de sangue fidelizados do Hemocentro Regional de Londrina-PR (Grupo 1), considerados de baixo risco de infecção pelo HIV-1; 147 indivíduos expostos ao HIV-1, mas não infectados, considerados de alto risco de infecção pelo auto-relato de comportamento sexual e/ou uso de drogas injetáveis com compartilhamento de seringas e agulhas com indivíduos infectados pelo HIV-1 (Grupo 2); 161 pacientes infectados pelo HIV-1, soroprevalentes, ambulatoriais, assintomáticos e com contagem de células T CD4+ ≥ 350/mm3 (Grupo 3) e 617 pacientes infectados pelo HIV-1, soroprevalentes, ambulatoriais ou internados, com os sintomas da doença e/ou contagem de células T CD4+ < 350/mm3 (Grupo 4). Os indivíduos dos grupos 2, 3, e 4 eram provenientes de vários centros especializados de atendimento de DST de Londrina e região do Estado do Paraná, atendidos no Período de setembro de 2001 a dezembro de 2003. O DNA genômico foi extraído de células do sangue periférico criopreservadas e o gene do SDF1 foi amplificado pela reação em cadeia da polimerase (PCR). Os produtos da PCR foram submetidos à digestão enzimática utilizando-se Msp I ou Hpa II e analisados pelo método do polimorfismo do comprimento do fragmento de restrição (RFLP). Os produtos de digestão enzimática foram avaliados pela eletroforese em gel de agarose 2% e coloração com brometo de etídio ou pela eletroforese em gel de acrilamida 10% e coloração com prata.

Objetivos

Determinar o polimorfismo genético do SDF 1 (ausência de mutação SDF 1 wild type, mutação em heterozigoze SDF 1/ SDF 13´A, mutação em homozigoze SDF1 3´A/ SDF1 3´A) em pessoas infectadas e não infectadas por HIV; Determinar o polimorfismo genético do SDF 1 em candidatos a doadores de sangue do Hemocentro Regional de Londrina, PR; Determinar o polimorfismo genético do SDF 1 em pessoas não infectadas por HIV, porém com comportamento de risco para infecção por esse vírus; Determinar o polimorfismo genético do SDF 1 em pessoas infectadas por HIV, assintomáticas de aids; Determinar o polimorfismo genético do SDF 1 em pacientes com aids.

Materiais e Método

A amostra foi obtida de forma seriada, por conveniência de tempo e local, de pessoas atendidas no Hemocentro Regional de Londrina; no Centro de Orientação e Apoio Sorológico (COAS), alocados no Centro de Referência Dr. Bruno Piancastelli Filho, Londrina; pessoas atendidas no Hospital Universitário e Ambulatório do Hospital de Clínicas da Universidade Estadual de Londrina. A amostra foi constituída por indivíduos adultos, de ambos os sexos e com idade maior de 13 anos, divididos em quatro grupos: Grupo 1 – doadores de sangue fiéis ao Hemocentro Regional de Londrina, com sorologias negativas para: doença de Chagas; sífilis; hepatite C; hepatite B; HTLV I e II; HIV e com concentrações séricas normais de alinina aminotransferase (ALT). Grupo 2 – pessoas HIV negativo com comportamento de risco para esse tipo de infecção. Grupo 3 – pessoas infectadas por HIV, assintomáticas, com contagem de células CD4 + > 400 células/ mm³. Grupo 4 – pacientes com aids, segundo os critérios do CDC, 1993, e contagem de células CD4+ < 200 células/mm³. O estudo do polimorfismo genético do SDF 1 foi realizado nos indivíduos dos Grupos 1, 2, 3 e 4, através de análise do polimorfismo no comprimento dos fragmentos de restrição (RFLP) após digestão enzimática do produto obtido da reação em cadeia da polimerase (PCR), segundo técnica descrita na literatura (Winkler <i>et al</i>., 1998).

Resultados - Parciais ou Finais

As freqüências da mutação em homozigose do SDF13’A foram de 3,7%, 6,1%, 4,3% e 5,3%, entre os grupos 1, 2, 3 e 4, respectivamente (p=0,5120). A freqüência geral do alelo mutante SDF13’A foi de 0,1984 e não apresentou diferença significativa entre os quatro grupos analisados (p=0,2744). A freqüência do alelo SDF13’A obtida nessa amostra poderia ser explicada pela estrutura étnica heterogênea da população brasileira e confirma a distribuição global do polimorfismo genético do SDF1. Os resultados obtidos reforçam a hipótese de que o alelo SDF13’A, isoladamente, pode não prevenir o risco de infecção pelo HIV-1. A presença de outros polimorfismos genéticos poderia exercer uma influência adicional ou sinérgica com o polimorfismo genético do SDF1 para a vulnerabilidade à infecção pelo HIV-1 e para os diferentes espectros de evolução da infecção nos indivíduos atendidos em Londrina e região do Estado do Paraná.

Palavras-Chave: 
Fatores genéticos de risco. Polimorfismo genético. Fator 1 derivado do estroma da medula óssea (SDF1). Vírus da Imunodeficiência Humana tipo 1 (HIV-1). Síndrome da imunodeficiência adquirida (aids). Quimiocinas.

Divulgação e/ou Publicações

REICHE, E.M.V. et al. Frequencies of the stromal cell derived factor 1 chemokine (SDF1) genetic polymorphism and SDF13’A allele in human immunodeficiency virus type 1 in non infected and infected individuals. In: MEETING OF THE BRAZILIAN SOCIETY OF IMMUNOLOGY, 28., 2003, Rio de Janeiro.

__. Frequencies of the stromal cell derived factor 1 chemokine (SDF1) genetic polymorphism and SDF13’A allele in human immunodeficiency virus type 1 in non infected and infected individuals. In: SIMPÓSIO BRASILEIRO DE PESQUISA EM HIV/AIDS, 5., 2004, Rio de Janeiro.

__. SDF1 genetic polymorphism in healthy individuals, in HIV-1 exposed but uninfected patients, and in HIV-1 infected patients from Brazilian population. In: MEETING OF THE BRAZILIAN SOCIETY OF IMMUNOLOGY, 29., 2004, Minas Gerais.

__. Sociodemographic and epidemiological characteristics associated with the human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) infection in HIV-1 exposed but uninfected individuals, and in HIV-1 infected patients from a southern Brazilian population. Revista do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo, São Paulo, v.47, n.5, Sept.-Oct. 2005 (in press).

__. The effect of SDF1 genetic polymorphism in the clinical course of HIV-1 infection. In: MEETING OF THE BRAZILIAN SOCIETY OF IMMUNOLOGY, 29., 2004, Minas Gerais.