Pesquisador(es)
Pesquisador(es) Responsável(eis):
Dirceu Bartolomeu Greco
Instituição
Instituição:
Universidade Federal de Minas Gerais, Faculdade de Medicina, Departamento de Clínica Médica.
Parcerias institucionais:
Universidade Federal do Rio de Janeiro – UFRJ.
Período de Vigência:
2003 - 2004
Situação:
Concluída
Introdução e Justificativa
O conhecimento das seqüências de nucleotídeos dos vírus que circulam no Brasil poderá auxiliar o melhor entendimento da relação entre a variabilidade do vírus e suas propriedades principais como: patogenicidade, antigenicidade, transmissibilidade e disseminação, ou mesmo fornecer dados importantes, que poderão ser utilizados em benefício do diagnóstico, tratamento, controle da doença e preparação de vacinas. O desenvolvimento de vacinas eficazes e seguras para o HIV requer a compreensão da resposta imunológica versus diversidade viral. Embora tenha sido demonstrada a exequibilidade das vacinas para aids, os mecanismos de imunidade protetora e o grau de imunidade cruzada são desconhecidos. Ainda não está claro se os subtipos virais são relevantes para o desenvolvimento de vacina, ou seja, se um único produto vacinal será mundialmente efetivo, ou se será necessário desenvolver produtos vacinais subtipos específicas. Dessa forma, torna-se necessário conhecer a extensão da variabilidade do HIV para avaliação de eficácia de futuros produtos vacinais.
Objetivos
Analisar filogenética e antigenicamente as cepas de HIV-1 circulantes no Estado de Minas Gerais; Amplificar por PCR os genes gag (p24), pol (protease e transcriptase reversa) e env (região C2V3) de amostras de HIV-1; Clonar os fragmentos amplificados; Seqüenciar automaticamente os fragmentos amplificados dos genes gag (p24), pol (pd região catalítica da RT) e env (região C2V3); Realizar a análise filogenética das cepas.
Materiais e Método
Foram utilizadas alíquotas de ImL de plasma, extraídas de 5 mL de sangue total em EDTA, provenientes de 100 pacientes incluídos na Renageno. Extração do RNA viral com kit específico. Amplificação por PCR dos genes gag (p24), pol/(protease e Rt) e env (CZV3). – obtenção de cDNA, a partir do RNA viral plasmático, utilizando iniciadores aleatórios (random primers). As amplificações dos genes gag (p24), pol/(protease e Rt) e env (C2V3) foram realizadas utilizando-se iniciadores específicos. Purificação dos fragmentos amplificados para clonagem dos genes. Purificação dos fragmentos amplificados para seqüenciamento dos genes. Clonagem dos genes gag (~24)~pol (protease e Rt) e env(CZV3). Obtenção de plasmídio em pequena escala. Seqüenciamento dos genes gag (p24), pol(protease e Rf) e env(C2V3) utilizando o seqüenciador automático ABI 3100.
Resultados - Parciais ou Finais
Resultados preliminares entre soroconvertores recentes do Projeto Horizonte. Análise da protesase revelou 96% de HIV-1 subtipo B, 3% F e 1% D. Análise de C2V3/env confirmou esses achados. Seis variantes de B com diferentes tetrapeptídeos foram encontrados: GPGR (45%), GPGQ, GFGR, GPGK, GPGA e GRGR. Em Resumo, o subtipo B ainda é o mais prevalente nessa coorte. Não foram encontrados genomas potencialmente recombinantes na amostra. Houve alta divergência em relação ao consenso B na região da alça V3.
Palavras-Chave:
HIV. Filogênese. Minas Gerais.
Divulgação e/ou Publicações
ALEIXO, A. W.; CLETO, S.C.; GRECO, D. B. Genotypic anti-retroviral resistance profile among individuals failing HAART in Brazil. In: THE INTERNATIONAL AIDS CONFERENCE, 15., 2004, Thailand. Proceedings... Bankok: International AIDS Society, 2004. Abstract WePeB5719.
ALEIXO, W. et al. Mutations related to primary resistance to anti-retrovirals among newly HIV-1 infected individuals in Belo Horizonte Brazil. In: IAS CONFERENCE ON HIV PATHOGENESIS AND TREATMENT, 2., 2003, Paris. Proceedings... Paris: International AIDS Society, 2003. Abstract 242.
__. HIV phylogenetic analysis and genetic characterization in newly infected individuals in Belo Horizonte Brazil. In: IAS CONFERENCE ON HIV PATHOGENESIS AND TREATMENT, 2., 2003, Paris. Proceedings... Paris: International AIDS Society, 2003. Abstract 259.
GRECO, M. et al. Adherence of bisexual HIV negative male to safe sex occurs more consistently in homosexual than in heterosexual practices – Project Horizonte, Belo Horizonte, Brazil - 1994-2001. In: INTERNATIONAL AIDS CONFERENCE, 14., 2002, Durban. Proceedings... Bankok: International AIDS Society, 2004. Abstract MoPeD3558.
TUPINAMBAS, U.; ALEIXO, A.V.; GRECO, D. B. Performance of genotyping for patients failing ARV in a Reference Center for HIV/AIDS in Belo Horizonte, Brazil (Project GERAIS). In: INTERNATIONAL AIDS CONFERENCE, 15., 2004, Thailand. Proceedings... Bankok: International AIDS Society, 2004. Abstract WePeB5697.
ALEIXO, W. et al. Mutations related to primary resistance to anti-retrovirals among newly HIV-1 infected individuals in Belo Horizonte Brazil. In: IAS CONFERENCE ON HIV PATHOGENESIS AND TREATMENT, 2., 2003, Paris. Proceedings... Paris: International AIDS Society, 2003. Abstract 242.
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TUPINAMBAS, U.; ALEIXO, A.V.; GRECO, D. B. Performance of genotyping for patients failing ARV in a Reference Center for HIV/AIDS in Belo Horizonte, Brazil (Project GERAIS). In: INTERNATIONAL AIDS CONFERENCE, 15., 2004, Thailand. Proceedings... Bankok: International AIDS Society, 2004. Abstract WePeB5697.
